培養(yǎng)基,是指供給微生物、植物或動物(或組織)生長繁殖的,由不同營養(yǎng)物質(zhì)組合配制而成的營養(yǎng)基質(zhì)。
一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無機(jī)鹽(包括微量元素)、維生素和水等幾大類物質(zhì)。培養(yǎng)基既是提
供細(xì)胞營養(yǎng)和促使細(xì)胞增殖的基礎(chǔ)物質(zhì),也是細(xì)胞生長和繁殖的生存環(huán)境。
培養(yǎng)基種類很多,根據(jù)配制原料的來源可分為自然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基、半合成培養(yǎng)基;根據(jù)物理狀態(tài)可
分為固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基;根據(jù)培養(yǎng)功能可分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基、加富培養(yǎng)
基、鑒別培養(yǎng)基等;根據(jù)使用范圍可分為細(xì)菌培養(yǎng)基、放線菌培養(yǎng)基、酵母菌培養(yǎng)基、真菌培養(yǎng)基等。
培養(yǎng)基配成后一般需測試并調(diào)節(jié) pH,還須進(jìn)行滅菌,通常有高溫滅菌和過濾滅菌。培養(yǎng)基由于富含營養(yǎng)
物質(zhì),易被污染或變質(zhì)。配好后不宜久置,zui好現(xiàn)配現(xiàn)用。
培養(yǎng)基制備過程
1.配料
配方換算→在容器中加入少量水(蒸餾水,自然水)→按照配方稱取各種藥品(依次加入)→加足所需水
量(一藥一勺,取藥后立即蓋上瓶蓋)。
2.溶解
淀粉溶解:少量冷水調(diào)成糊狀。加熱溶解,特別是加有瓊脂的培養(yǎng)基,一定要煮沸,瓊脂的熔解溫度
95-97℃ ,且需要邊加熱邊攪拌以防止燒焦。
3.調(diào) PH
用 1N 的鹽酸或 1N 的 NaOH 把培養(yǎng)基調(diào)節(jié)到所要求的值。
4.過濾
濾紙或棉花進(jìn)行過濾。(有時可以省去) [4]
5.分裝
一般培養(yǎng)基放在三角瓶或試管中滅菌使用。
(1)三角瓶
若作靜置培養(yǎng),則 100ml 培養(yǎng)基/250ml 的三角瓶,zui多不能超過 150ml 培養(yǎng)基/250ml 的
三角瓶,否則滅菌時培養(yǎng)基沸騰容易污染棉塞,造成染菌;若作搖瓶培養(yǎng),則 15-20ml 培養(yǎng)基/250ml 的
三角瓶,保證通氣良好。
(2)試管分裝
液體培養(yǎng)基一般裝 4-5ml,約試管的 1/4 高度;
固體斜面培養(yǎng)基一般裝 3-4ml,約試管的 1/5 高度。
6.包扎
分裝好后,塞上棉塞,在用牛皮紙將棉塞包裹好,防止滅菌時水份進(jìn)入把棉塞弄濕。
7.滅菌
按配方上要求的溫度、壓力進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。如果滅菌的溫度太高,營養(yǎng)成分會被破壞,培養(yǎng)
基中的糖、氨基酸會使培養(yǎng)基的顏色變深。
8.擺斜面
滅菌后需要擺斜面的試管要趁熱斜著擺放,使其凝固成為一個斜面,約占試管長度的 1/2。
9.貯存
培養(yǎng)基在 30℃下放置一天,無污染的即可使用。一般用牛皮紙包裹好存放于 2-8℃冰箱中備用
培養(yǎng)基配制好后為什么必須立即滅菌?
大家都知道,培養(yǎng)基是供微生物生長、繁殖、代謝的混合養(yǎng)料。由于微生物具有不同的營養(yǎng)類型,對營養(yǎng)
物質(zhì)的要求也各不相同,加之實驗和研究的目的不同,所以培養(yǎng)基的種類很多,使用的原料也各有差異。
為了達(dá)到實驗和研究的目的,要按照培養(yǎng)基的配方進(jìn)行配制。而任何一種培養(yǎng)基一經(jīng)制成就應(yīng)及時*滅
菌,以備純 培養(yǎng)用。一般培養(yǎng)基的滅菌采用高壓蒸汽滅菌。
發(fā)酵過程中,培養(yǎng)基滅菌主要有以下幾個原因:如不滅菌,會使生物反應(yīng)的基質(zhì)或產(chǎn)物,因雜菌的消耗而
損失,造成生產(chǎn)能力的下降;雜菌也會產(chǎn)生代謝產(chǎn)物,這 就使產(chǎn)物的提取更加困難,造成得率降低,產(chǎn)品
質(zhì)量下降;雜菌大量繁殖后,會改變反應(yīng)液的 pH 值,使反應(yīng)異常;有些雜菌會分解產(chǎn)物,使生產(chǎn)失敗;如果發(fā)
生噬 菌體污染,生產(chǎn)菌細(xì)胞將被裂解,使生產(chǎn)失敗。
培養(yǎng)基滅菌是殺滅培養(yǎng)基中本身的原著菌或在空氣中附著的雜菌,更好的讓目標(biāo)菌生長(減少雜菌消耗培養(yǎng)
基中的營養(yǎng),而且有些雜菌會抑制你目標(biāo)菌的生長)。一般人工培養(yǎng)菌基本上是盡可能讓其生長快速或者產(chǎn)
生代謝產(chǎn)物,因此就讓其在zui適培養(yǎng)基上生長,以減少培養(yǎng)時間與提高經(jīng)濟(jì)效益。
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